Sulforapane என்றால் என்ன?

சல்ஃபரோபேன் ப்ரோக்கோலி, முட்டைக்கோஸ், காலிஃபிளவர் மற்றும் பிரஸ்ஸல்ஸ் முளைகள் போன்ற சிலுவை காய்கறிகளில் காணப்படும் ஆர்கனோசல்ஃபர் சேர்மங்களின் ஐசோதியோசயனேட் குழுவில் உள்ள ஒரு பைட்டோகெமிக்கல் ஆகும். இது போக் சோய், கேல், காலார்ட்ஸ், கடுகு கீரைகள் மற்றும் வாட்டர்கெஸ் ஆகியவற்றிலும் காணப்படுகிறது. சல்போராபேன் பல்வேறு வகையான புற்றுநோய்களைத் தடுக்க உதவுகிறது என்று ஆராய்ச்சி ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன Nrf2 உற்பத்தியை செயல்படுத்துகிறது, அல்லது நியூக்ளியர் காரணி எரித்ராய்டு 2-தொடர்புடைய காரணி, ஒரு டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணி, இது ஆக்ஸிஜனேற்றங்களுக்கு செல்லின் பதிலைக் கட்டுப்படுத்தும் பாதுகாப்பு ஆக்ஸிஜனேற்ற வழிமுறைகளை ஒழுங்குபடுத்துகிறது. பின்வரும் கட்டுரையின் நோக்கம் சல்ஃபோராபேனின் செயல்பாட்டை விவரிப்பதாகும்.

சுருக்கம்

KEAP1-Nrf2-ARE ஆக்ஸிஜனேற்ற அமைப்பு உயிரணுக்கள் ஆக்ஸிஜனேற்ற மற்றும் ஜீனோபயாடிக் அழுத்தங்களுக்கு பதிலளிக்கும் முக்கிய வழிமுறையாகும். சல்ஃபோராபேன் (SFN), சிலுவை காய்கறிகளிலிருந்து பெறப்பட்ட எலக்ட்ரோஃபிலிக் ஐசோதியோசயனேட், KEAP1-Nrf2-ARE பாதையை செயல்படுத்துகிறது மற்றும் நாள்பட்ட ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தம் ஒரு முக்கிய காரணவியல் பாத்திரத்தை வகிக்கும் நோய்களுக்கான சிகிச்சையில் ஒரு மூலக்கூறாக மாறியுள்ளது. SFN உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட வளர்ப்பு, மனித விழித்திரை நிறமி எபிடெலியல் (RPE-1) செல்களின் மைட்டோகாண்ட்ரியா, Nrf2 மற்றும் அதன் சைட்டோபிளாஸ்மிக் இன்ஹிபிட்டர் KEAP1 இரண்டிலிருந்தும் சுயாதீனமான ஹைப்பர்ஃபியூஷனுக்கு உட்படுகிறது என்பதை நாங்கள் இங்கு நிரூபிக்கிறோம். அப்போப்டொசிஸின் போது மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் நுண்துளை உருவாவதைத் தடுப்பதன் மூலம் மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவு சைட்டோபுரோடெக்டிவ் என அறிவிக்கப்பட்டுள்ளது, மேலும் இதற்கு இணங்க, அப்போப்டொசிஸ்-தூண்டுதல், ஸ்டோரோஸ்போரின் ஆகியவற்றுக்கு வெளிப்படும் SFN-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட செல்களின் Nrf2-சுயாதீனமான, சைட்டோபுரோடெக்ஷனைக் காட்டுகிறோம். இயந்திரரீதியாக, SFN ஆனது கரையக்கூடிய பிளவு காரணி Drp1 ஐ மைட்டோகாண்ட்ரியா மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களுக்கு ஆட்சேர்ப்பு மற்றும்/அல்லது தக்கவைப்பைத் தணிக்கிறது ஆனால் ஒட்டுமொத்த Drp1 மிகுதியைப் பாதிக்காது. இந்தத் தரவுகள் SFN இன் நன்மை பயக்கும் பண்புகள் KEAP1-Nrf2-ARE அமைப்பைச் செயல்படுத்துவதைத் தாண்டி நீண்டுள்ளது என்பதை நிரூபிக்கிறது மற்றும் பல மருத்துவ பரிசோதனைகளில் இந்த ஏஜெண்டின் தற்போதைய பயன்பாட்டைக் கருத்தில் கொண்டு மேலும் விசாரணைக்கு உத்தரவாதம் அளிக்கிறது.

முக்கிய வார்த்தைகள்: சல்போராபேன், Nrf2, Drp1, மைட்டோகாண்ட்ரியா, பிளவு, இணைவு, அப்போப்டோசிஸ்

அறிமுகம்

சல்போராபேன் என்பது மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவின் Nrf2-சுயாதீன தடுப்பானாகும்

சல்ஃபோராபேன் (SFN) என்பது ஐசோதியோசயனேட் கலவை ஆகும், இது பொதுவாக சிலுவை காய்கறிகளில் இருந்து பெறப்படுகிறது [56]. சேதமடைந்த உயிரணுக்களில் இருந்து ஹைட்ரோலைடிக் என்சைம் மைரோசினேஸின் வெசிகுலர் வெளியீட்டின் மூலம் வேட்டையாடலுக்கு ஜீனோபயாடிக் எதிர்வினையாக இது தாவரங்களில் உருவாக்கப்படுகிறது; இந்த நொதி குளுக்கோசினோலேட்டுகளை ஐசோதியோசைன்ட்களாக மாற்றுகிறது [42]. கடந்த இரண்டு தசாப்தங்களாக, SFN அதன் புற்று நோய் எதிர்ப்பு, ஆக்ஸிஜனேற்ற மற்றும் ஆண்டிமைக்ரோபியல் பண்புகளுக்காக விரிவாக வகைப்படுத்தப்பட்டுள்ளது [57]. இந்த செயல்திறனின் பெரும்பகுதி KEAP1-Nrf2-ஆன்டி ஆக்சிடென்ட் ரெஸ்பான்ஸ் எலிமெண்ட் (ARE) சிக்னலிங் பாதையை மாற்றியமைக்க SFN இன் திறனுக்குக் காரணம், இருப்பினும் கலவையின் கூடுதல் செயல்பாடுகள் அடையாளம் காணப்பட்டுள்ளன, இதில் ஹிஸ்டோன் டீசெடைலேஸ் செயல்பாடு மற்றும் செல் சுழற்சி முன்னேற்றம் ஆகியவை அடங்கும். 29]. Nrf2 என்பது முதன்மை ஆக்ஸிஜனேற்ற டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணி மற்றும் ஹோமியோஸ்டாசிஸ் நிலைமைகளின் கீழ், சைட்டோபிளாஸ்மிக் Cullin3KEAP1 ubiquitin ligase complex [20] செயல்பாட்டின் மூலம் அதன் நிலைத்தன்மை அடக்கப்படுகிறது. குறிப்பாக, டைமெரிக் சப்ஸ்ட்ரேட் அடாப்டர் KEAP2 உடன் பிணைப்பதன் மூலம் Nrf3 Cullin1KEAP1 லிகேஸுக்கு ஆட்சேர்ப்பு செய்யப்படுகிறது, பின்னர் புரோட்டீசோம்-மத்தியஸ்த சிதைவுக்கான டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணியை இலக்காகக் கொண்ட பாலியூப் சங்கிலிகளுடன் மாற்றியமைக்கப்படுகிறது. இந்த அமைப்புமுறை விற்றுமுதல் அழுத்தப்படாத கலங்களில் Nrf2 இன் அரை-வாழ்க்கையை ~15 நிமிடங்களுக்கு [30], [33], [46], [55] கட்டுப்படுத்துகிறது. பல வகையான அழுத்தங்களுக்கு, குறிப்பாக ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்திற்கு பதிலளிக்கும் விதமாக, KEAP1, சிஸ்டைன் நிறைந்த புரதம், ஒரு ரெடாக்ஸ் சென்சாராக செயல்படுகிறது, மேலும் முக்கியமான சிஸ்டைன்களின் ஆக்ஸிஜனேற்ற மாற்றமானது, குறிப்பாக KEAP151 இன் C1, CUL2 இலிருந்து Nrf1-KEAP3 ஐ பிரிக்கிறது. 2], [8], [20]. குறிப்பிடத்தக்க வகையில், SFN மற்றும் பிற Nrf55 ஆக்டிவேட்டர்கள், KEAP2 இன் C151 ஐ மாற்றுவதன் மூலம் ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்தைப் பிரதிபலிக்கின்றன எ.கா [1]. Nrf21 இன் நிலைப்படுத்தல் அதன் கருவுக்கு இடமாற்றம் செய்ய அனுமதிக்கிறது, அங்கு அது இரண்டாம் கட்ட ஆக்ஸிஜனேற்ற மற்றும் நச்சுத்தன்மை மரபணுக்களின் பேட்டரியின் வெளிப்பாட்டைத் தூண்டுகிறது. Nrf2 சிறிய மாஃப் புரதங்களுடன் ஹெட்டோரோடைமரைசேஷன் மூலம் அதன் அறிவாற்றல் இலக்கு மரபணுக்களின் ஆக்ஸிஜனேற்ற மறுமொழி ஊக்குவிப்பு கூறுகளுடன் (ARE) பிணைக்கிறது [2]. இந்த அமைப்பு SFN, மைட்டோகாண்ட்ரியாவால் உருவாக்கப்படும் ஃப்ரீ ரேடிக்கல்கள் [19] அல்லது ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்தின் பிற உடலியல் மூலங்கள் [16] போன்ற மறைமுக ஆக்ஸிஜனேற்றிகளுக்கு மாறும் மற்றும் உணர்திறன் கொண்ட பதிலை அளிக்கிறது.

மைட்டோகாண்ட்ரியா என்பது டைனமிக், சப்செல்லுலர் உறுப்புகள் ஆகும், அவை ஏடிபி உற்பத்தி மற்றும் உள்செல்லுலார் கால்சியம் பஃபரிங் முதல் ரெடாக்ஸ் ஒழுங்குமுறை மற்றும் அப்போப்டொசிஸ் [13], [49] வரையிலான செல்லுலார் செயல்பாடுகளை ஒழுங்குபடுத்துகின்றன. மைட்டோகாண்ட்ரியா உயிரணுவிற்குள் உள்ள எதிர்வினை ஆக்ஸிஜன் இனங்களின் (ROS) முக்கிய ஆதாரமாகவும் உள்ளது. மைட்டோகாண்ட்ரியல் செயல்பாட்டின் சரியான கட்டுப்பாடு, செல்லுலார் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய ஏடிபி உற்பத்தியை மேம்படுத்துவதற்கு அவசியமானது, அதே நேரத்தில் அதிகப்படியான ஃப்ரீ ரேடிக்கல் உற்பத்தியின் தீங்கு விளைவிக்கும் விளைவுகளை குறைக்கிறது. மைட்டோகாண்ட்ரியல் செயல்பாட்டின் சிறந்த பண்பேற்றத்திற்கான ஒரு முக்கியமான தேவை, மைட்டோகாண்ட்ரியாவின் திறன், உயிர்வேதியியல் இயந்திரங்கள் மற்றும் ஒரு பரந்த, பதிலளிக்கக்கூடிய நெட்வொர்க்கின் ஒரு பகுதியாக சுயாதீனமாக செயல்படும் திறன் ஆகும்.

மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க் உருவவியல் மற்றும் செயல்பாடு ஆகியவை பிளவு மற்றும் இணைவுக்கு இடையே உள்ள ஒழுங்குபடுத்தப்பட்ட சமநிலையால் தீர்மானிக்கப்படுகின்றன. உயிரணுப் பிரிவின் போது மைட்டோகாண்ட்ரியாவின் மகள் செல் மரபுரிமைக்கு மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு தேவைப்படுகிறது [28] அத்துடன் மைட்டோபாகி [1] எனப்படும் டிபோலரைஸ் செய்யப்பட்ட அல்லது சேதமடைந்த மைட்டோகாண்ட்ரியாவின் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட, தன்னியக்க சிதைவுக்கு. மாறாக, மைட்டோகாண்ட்ரியல் மரபணுக்களை நிரப்புவதற்கும், அண்டை மைட்டோகாண்ட்ரியாவிற்கு இடையே எலக்ட்ரான் போக்குவரத்து சங்கிலி கூறுகளை பகிர்வதற்கும் இணைவு தேவைப்படுகிறது [54]. மூலக்கூறு மட்டத்தில், மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு மற்றும் இணைவு ஆகியவை பெரிய, டைனமின் போன்ற GTPases மூலம் கட்டுப்படுத்தப்படுகின்றன. மூன்று நொதிகள் முதன்மையாக இணைவைக் கட்டுப்படுத்துகின்றன: மைட்டோஃபுசின்கள் 1 மற்றும் 2 (Mfn1/2) ஆகியவை இரண்டு-பாஸ் வெளிப்புற சவ்வு புரதங்கள் ஆகும், அவை வெளிப்புற சவ்வு இணைவை அருகிலுள்ள மைட்டோகாண்ட்ரியா [15], [25], [37] இடையே உள்ள பன்முக தொடர்புகளின் மூலம் மத்தியஸ்தம் செய்கின்றன, அதே நேரத்தில் OPA1 ஒரு உள் உள் சவ்வுகளின் கலவையை ஒழுங்குபடுத்துவதன் மூலம் ஒரே நேரத்தில் மேட்ரிக்ஸ் இணைப்பை உறுதி செய்யும் சவ்வு புரதம் [5]. மூன்று புரதங்களின் GTPase செயல்பாடு வலுவான இணைவுக்கு [5], [18] தேவைப்படுகிறது, மேலும் OMA1 [1], PARL [14] மற்றும் YME6L [1] ஆகிய புரோட்டீஸ்களால் மைட்டோகாண்ட்ரியல் உள் சவ்வுக்குள் சிக்கலான புரோட்டியோலிசிஸ் மூலம் OPA45 மேலும் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது. ]. முக்கியமாக, சேதமடைந்த மற்றும் ஆரோக்கியமான மைட்டோகாண்ட்ரியா [26] ஒருங்கிணைப்பை அடக்குவதற்கு, திறமையான இணைவுக்கு அப்படியே மைட்டோகாண்ட்ரியல் சவ்வு திறன் தேவைப்படுகிறது.

மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு முதன்மையாக டைனமின் தொடர்பான புரதம் 1 (Drp1/DNM1L) எனப்படும் சைட்டோசோலிக் புரதத்தால் வினையூக்கப்படுகிறது. Drp1 சைட்டோசோலில் இருந்து மைட்டோகாண்ட்ரியல் வெளிப்புற மென்படலத்தில் பிளவுபடுவதற்கான வருங்கால தளங்களுக்கு ஆட்சேர்ப்பு செய்யப்படுகிறது [43]. வெளிப்புற மென்படலத்தில் Drp1 க்கான முக்கிய ஏற்பிகள் மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு காரணி (Mff) [32] மற்றும், குறைந்த அளவிற்கு, பிளவு 1 (Fis1) [51] ஆகும். கூடுதலாக, ஒரு டிகோய் ஏற்பி, MIEF1/MiD51 கண்டுபிடிக்கப்பட்டது, இது சாத்தியமான பிளவு தளங்களில் Drp1 புரதத்தின் செயல்பாட்டை மேலும் கட்டுப்படுத்துகிறது [58]. மைட்டோகாண்ட்ரியல் வெளிப்புற சவ்வில் இணைக்கப்பட்டவுடன், Drp1 மைட்டோகாண்ட்ரியனின் உடலைச் சுற்றியுள்ள சுழல் போன்ற அமைப்புகளாக ஒலிகோமரைஸ் செய்கிறது, பின்னர் மைட்டோகாண்ட்ரியல் வெளிப்புற மற்றும் உள் சவ்வுகளின் உடல் ரீதியிலான வெட்டுக்கு மத்தியஸ்தம் செய்ய GTP நீராற்பகுப்பிலிருந்து பெறப்பட்ட ஆற்றலைப் பயன்படுத்துகிறது [17]. எண்டோபிளாஸ்மிக் ரெட்டிகுலம்-பெறப்பட்ட குழாய்கள் Drp1 ஒலிகோமரைசேஷனுக்கு முன் மைட்டோகாண்ட்ரியாவின் ஆரம்பக் கட்டுப்படுத்தியாகச் செயல்படுகின்றன, இது சுருக்கப்படாத மைட்டோகாண்ட்ரியா, நிறைவு செய்யப்பட்ட Drp1 சுழல் [12] அனுமதிக்கப்பட்ட சுற்றளவை விட அகலமானது என்பதை அடிக்கோடிட்டுக் காட்டுகிறது. மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவுக்கு முந்தைய ஈஆர்-மைட்டோகாண்ட்ரியா தொடர்புகளுக்கு ஆக்டின் இயக்கவியல் முக்கியமானது [24]. மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவில் அதன் பங்கிற்கு கூடுதலாக, Drp1 பெராக்ஸிசோம்களின் பிளவை ஊக்குவிக்கிறது [40].

Drp1 ஆனது நன்கு வகைப்படுத்தப்பட்ட டைனமின் புரதத்துடன் மிகவும் ஒத்திருக்கிறது, இதில் இரண்டு புரதங்களும் N-டெர்மினல் GTPase டொமைன், சுய-ஒலிகோமரைசேஷனுக்கு முக்கியமான ஒரு நடுத்தர டொமைன் மற்றும் C-டெர்மினல் GTPase எஃபெக்டர் டொமைன் [31] ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது. Drp1 ஆனது அதன் ஏற்பி புரதங்களான Mff மற்றும் Fis1 உடனான தொடர்புகளின் மூலம் மைட்டோகாண்ட்ரியல் சவ்வுகளுக்கான தெரிவுநிலையை அடைகிறது. Drp1 பொதுவாக சைட்டோபிளாஸில் ஒரு ஹோமோடெட்ராமராக உள்ளது, மேலும் மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு தளங்களில் உயர் வரிசை அசெம்பிளி Drp2 [1] இன் மத்திய டொமைனால் மத்தியஸ்தம் செய்யப்படுகிறது.

மைட்டோகாண்ட்ரியல் செயல்பாடு மற்றும் KEAP1-Nrf2-ARE பாதை ஆகியவற்றுக்கு இடையே உள்ள மறைமுகமான இணைப்பைக் கருத்தில் கொண்டு, மைட்டோகாண்ட்ரியல் அமைப்பு மற்றும் செயல்பாட்டில் Nrf2 செயல்பாட்டின் விளைவுகளை நாங்கள் ஆராய்ந்தோம். SFN மைட்டோகாண்ட்ரியல் ஹைப்பர்ஃபியூஷனைத் தூண்டுகிறது, இது எதிர்பாராத விதமாக, Nrf2 மற்றும் KEAP1 இரண்டிலிருந்தும் சுயாதீனமாக உள்ளது என்பதை நாங்கள் இங்கு நிரூபிக்கிறோம். SFN இன் இந்த விளைவு Drp1 செயல்பாட்டைத் தடுப்பதன் மூலம் ஏற்படுகிறது. Nrf2-சுயாதீனமான அப்போப்டொசிஸிற்கான எதிர்ப்பை SFN வழங்குகிறது மற்றும் Drp1 இல் இருந்து குறைக்கப்பட்ட செல்களில் காணப்பட்டதைப் பிரதிபலிக்கிறது என்பதை நாங்கள் மேலும் நிரூபிக்கிறோம். Nrf2 ஐ நிலைப்படுத்தி செயல்படுத்துவதோடு, SFN மைட்டோகாண்ட்ரியல் இயக்கவியலை மாற்றியமைக்கிறது மற்றும் செல்லுலார் ஃபிட்னஸ் மற்றும் உயிர்வாழ்வைப் பாதுகாக்கிறது என்பதை இந்தத் தரவுகள் கூட்டாகக் குறிப்பிடுகின்றன.

முடிவுகள்

சல்ஃபோராபேன் Nrf2/KEAP1-இன்டிபென்டன்ட் ஹைபர்பியூஷன் ஆஃப் மைட்டோகாண்ட்ரியாவை தூண்டுகிறது

மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க் டைனமிக்ஸில் Nrf2 செயல்பாட்டின் விளைவுகளைப் படிக்கும் போது, ​​Nrf1 சிக்னலின் ஆற்றல்மிக்க ஆக்டிவேட்டரான சல்ஃபோராபேன் (SFN) உடன் அழியாத, மனித விழித்திரை நிறமி எபிடெலியல் (RPE-2) செல்களுக்கு சிகிச்சையளிப்பது, ஒரு வலுவான இணைவைத் தூண்டியது என்பதைக் கண்டறிந்தோம். மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க் வாகனம்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட கட்டுப்பாட்டு கலங்களுடன் ஒப்பிடும் போது (படம். 1A மற்றும் B). இந்த உயிரணுக்களில் உள்ள மைட்டோகாண்ட்ரியாவின் உருவவியல், முதன்மை மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு காரணி (படம் 1A) இன் எண்டோஜெனஸ் Drp1 இன் siRNA ஆல் குறைக்கப்பட்ட செல்களில் உள்ள மைட்டோகாண்ட்ரியாவை மிகவும் ஒத்திருக்கிறது. இந்த முடிவு மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு மற்றும் இணைவு நிலை கலத்தில் உள்ள Nrf2 நிலைகளுக்கு நேரடியாக பதிலளிக்கிறது என்ற புதிரான யோசனையை எழுப்பியது. இருப்பினும், பிற Nrf2 நிலைப்படுத்திகள் மற்றும் புரோட்டீசோம் இன்ஹிபிட்டர் MG132, ப்ரோ-ஆக்ஸிடன்ட் tBHQ, அல்லது Nrf2 இன்ஹிபிட்டர் KEAP1 இன் நாக் டவுன் போன்ற ஆக்டிவேட்டர்களுடன் செல்களின் தூண்டுதல் மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவைத் தூண்டவில்லை (படம். 1A மற்றும் B). இந்த கையாளுதல்களால் Nrf2 இன் நிலைப்படுத்தல், எண்டோஜெனஸ் Nrf2 (படம் 1C) க்கான வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங் மூலம் உறுதிப்படுத்தப்பட்டது. மேலும், Nrf2 இன் வெளிப்பாடு SFN-தூண்டப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியல் ஃப்யூஷனுக்காக விநியோகிக்கப்பட்டது, ஏனெனில் siRNA உடன் எண்டோஜெனஸ் Nrf2 இன் நாக் டவுன் இந்த பினோடைப்பை எதிர்க்கத் தவறிவிட்டது (படம். 1D'F). KEAP1 [2] இன் சிஸ்டைன் எச்சங்களை கோவலன்ட் முறையில் மாற்றியமைப்பதன் மூலம் SFN KEAP1-Nrf21-ARE பாதையைத் தூண்டுவதால், SFN-தூண்டப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியல் ஹைப்பர்ஃபியூஷன் KEAP1-சார்ந்த, ஆனால் Nrf1 சுயாதீன பாதை மூலம் தூண்டப்படுகிறதா என்பதை நிவர்த்தி செய்ய KEAP2 ஐ வீழ்த்தினோம். இருப்பினும், KEAP1 இன் குறைவு SFN-தூண்டப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவை ரத்து செய்வதிலும் தோல்வியடைந்தது (படம் 1GI). உண்மையில், SFN ஆனது KEAP1 (படம் 1G, குழு b மற்றும் குழு d) குறைவினால் தூண்டப்பட்ட பிளவு-சார்பு உருவ அமைப்பை மாற்றியது. இந்த முடிவுகள் SFN சிகிச்சையானது KEAP1-Nrf2-ARE பாதையில் இருந்து சுயாதீனமாக மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவை ஏற்படுத்துகிறது மற்றும் SFN மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு அல்லது இணைவு இயந்திரத்தின் கூறுகளை நேரடியாக பாதிக்கிறதா என்பதை விசாரிக்க வழிவகுத்தது.

சல்ஃபோராபேன் Drp1 இன் மைட்டோகாண்ட்ரியல் சங்கத்தை பாதிக்கிறது

SFN-சிகிச்சையானது மைட்டோகாண்ட்ரியல் ஹைப்பர்ஃபியூஷனைத் தூண்டுகிறது என்பதைக் கண்டறிந்ததன் அடிப்படையில், இந்த பினோடைப் அதிகப்படியான இணைவு செயல்பாட்டின் விளைவு அல்லது பிளவு செயல்பாட்டைத் தடுப்பது என்று நாங்கள் நியாயப்படுத்தினோம். இந்த இரண்டு சாத்தியக்கூறுகளுக்கும் இடையில் பாகுபாடு காட்ட, SFN இன் இருப்பு மற்றும் இல்லாத நிலையில் பெராக்ஸிசோம்களின் உருவ அமைப்பை ஒப்பிட்டுப் பார்த்தோம். பெராக்ஸிசோம்கள் மைட்டோகாண்ட்ரியாவைப் போலவே இருக்கின்றன, அவை டைனமிக் உறுப்புகளாகும், அவற்றின் வடிவம் மற்றும் நீளம் தொடர்ந்து ஃப்ளக்ஸ் இருக்கும் [44]. பெராக்ஸிசோம்கள் அவற்றின் வெளிப்புற மென்படலத்தில் Fis1 மற்றும் Mff இரண்டையும் கொண்டிருக்கின்றன, அதன் விளைவாக, Drp1-மத்திய பிளவு [22], [23] இலக்குகளாகும். இருப்பினும், பெராக்ஸிசோம்கள் மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க்கின் இணைவு இயந்திரங்களைப் பயன்படுத்துவதில்லை, அதன் விளைவாக, இணைவு [39] ஏற்படாது. மாறாக, சவ்வுகள் மற்றும் புரதங்கள் [44] டி நோவோ சேர்ப்பதன் மூலம் இருக்கும் பெராக்ஸிசோம்களின் நீளத்தை பெராக்ஸிசோமல் பிளவு எதிர்க்கிறது. பெராக்ஸிசோம்களில் Mfn1/2 மற்றும் OPA1 இல்லாததால், பிளவு இயந்திரத்தைத் தடுப்பதற்குப் பதிலாக இணைவு இயந்திரங்களை SFN செயல்படுத்தினால், பெராக்ஸிசோம் நீளம் பாதிக்கப்படாது என்று நாங்கள் நியாயப்படுத்தினோம். வாகனம்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட கலங்களில், பெராக்சிசோம்கள் குறுகிய, வட்டமான, பங்க்டிஃபார்ம் உறுப்புகளாகப் பராமரிக்கப்படுகின்றன (படம். 2, பேனல்கள் b மற்றும் d). இருப்பினும், SFN சிகிச்சையானது கட்டுப்பாட்டு செல்களுடன் ஒப்பிடும்போது பெராக்ஸிசோம் நீளத்தை ~2 மடங்கு அதிகரித்தது (படம். 2, பேனல்கள் f மற்றும் h). மேலும், பல பெராக்ஸிசோம்கள் மையத்திற்கு அருகில் கிள்ளப்பட்டன, இது ஒரு சாத்தியமான வெட்டுக் குறைபாட்டைக் குறிக்கிறது (படம். 2, குழு h, அம்புக்குறிகள்). அதேபோல், Drp1 siRNA உடன் மாற்றப்பட்ட கலங்களில் உள்ள பெராக்ஸிசோம்கள் அசாதாரணமாக நீளமாக இருந்தன (படம். 2, பேனல்கள் j மற்றும் l), பெராக்ஸிசோமல் பிளவுக்கு Drp1 தேவை என்பதை உறுதிப்படுத்துகிறது மற்றும் SFN-சிகிச்சையானது பிளவு இயந்திரத்தை சீர்குலைப்பதன் மூலம் மைட்டோகாண்ட்ரியல் மற்றும் பெராக்ஸிசோமல் பினோடைப்களை ஏற்படுத்துகிறது என்று பரிந்துரைக்கிறது.

Drp1 செயல்பாட்டை SFN எவ்வாறு கட்டுப்படுத்துகிறது என்பதை அடுத்து தீர்மானித்தோம். சாத்தியக்கூறுகளில் வெளிப்பாடு நிலைகளில் குறைப்பு, மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் ஆட்சேர்ப்பு / தக்கவைத்தல், ஒலிகோமரைசேஷன் அல்லது GTPase இன் நொதி செயல்பாடு ஆகியவை அடங்கும். இவற்றில் ஏதேனும் ஒன்றின் பற்றாக்குறை மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு மற்றும் ஹைபர்ஃபியூஷன் ஆகியவற்றைக் குறைக்கும். SFN-சிகிச்சைக்குப் பிறகு Drp1 புரத அளவுகளில் மீண்டும் உருவாக்கக்கூடிய மாற்றங்களை நாங்கள் கண்டறியவில்லை (படங்கள். 1C மற்றும் 3A), எனவே Drp1 நிலைத்தன்மை அல்லது வெளிப்பாட்டை SFN மாற்றாது என்று முடிவு செய்தோம், Drp1 ஆனது >10 h [50] மற்றும் எங்கள் SFN சிகிச்சைகள் குறுகிய காலமே. அடுத்து, SFN ஆனது Drp1 மைட்டோகாண்ட்ரியாவிற்கு ஆட்சேர்ப்பு அல்லது தக்கவைப்பை பாதித்ததா என்பதை நாங்கள் ஆராய்ந்தோம். மைட்டோகாண்ட்ரியல் பின்னத்தில் இருந்து Drp1 இன் இழப்பை SFN தூண்டியதாக பிரிவு ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன (படம். 3A, பாதைகள் 7-8 மற்றும் படம். 3B). முன்னர் [43] தெரிவிக்கப்பட்டபடி, ஒரு சிறிய பகுதியான Drp1 (~3%) மட்டுமே மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க்குடன் எந்த நேரத்திலும் நிலையான நிலையின் போது சைட்டோபிளாஸில் வசிக்கும் பெரும்பாலான நொதிகளுடன் தொடர்புடையது (படம். 3A, பாதைகள் 5-8 ) SFN-சிகிச்சைக்குப் பிறகு மைட்டோகாண்ட்ரியா-உள்ளூர்மயமாக்கப்பட்ட, punctate Drp40 foci இல் ~1% குறைப்பைக் காட்டிய இணை-உள்ளூர்மயமாக்கல் பகுப்பாய்வைப் பயன்படுத்தி இந்த பின்னம் தரவு உறுதிப்படுத்தப்பட்டது (படம். 3C மற்றும் D). ஒன்றாக, இந்தத் தரவுகள், SFN ஆல் தூண்டப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவு, மைட்டோகாண்ட்ரியாவுடன் Drp1 இன் அட்டன்யூடேட்டட் தொடர்பு காரணமாக, குறைந்த பட்சம் பகுதியளவு என்று குறிப்பிடுகிறது. மைட்டோகாண்ட்ரியல் ஆட்சேர்ப்பு மற்றும் Drp1 இன் மைட்டோகாண்ட்ரியல் தக்கவைப்புக்கு SFN குறுக்கிடுகிறதா அல்லது இரண்டுக்கும் இடையில் எங்கள் தரவு வேறுபடுத்தவில்லை, ஏனெனில் எண்டோஜெனஸ் Drp1 இன் பகுப்பாய்வு நேரடி-செல் நுண்ணோக்கி மூலம் GTPase ஐக் காட்சிப்படுத்துவதற்கு ஏற்றதாக இல்லை.

சல்ஃபோராபேன் ஸ்டாரோஸ்போர்டைன்-தூண்டப்பட்ட அப்போப்டொசிஸுக்கு எதிராக Nrf2 இன் சுயாதீன பாதுகாப்பை வழங்குகிறது

அப்போப்டொசிஸின் போது பேக்ஸ்/பேக் உருவாக்கிய வெளிப்புற மைட்டோகாண்ட்ரியல் மென்படலத்தில் துளைகளை உருவாக்குவதற்கு மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு அனுமதிக்கப்படுகிறது என்பதை முந்தைய வேலை காட்டுகிறது [11]. Drp1 ஆனது அப்போப்டொசிஸின் போது மைட்டோகாண்ட்ரியாவிற்கு தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டதாகக் காட்டப்பட்டது [11] மேலும், இதனுடன் இணங்க, துண்டாக்கப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியா செயல்முறையின் ஆரம்பத்தில் காணப்பட்டது [27]. மாறாக, மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவைத் தடுப்பது, சைட்டோக்ரோம் சி வெளியீட்டை அனுமதிக்கும் வெளிப்புற சவ்வு துளைகளின் உருவாக்கத்தைத் தடுப்பதன் மூலம் அப்போப்டொசிஸைத் தடுப்பதாகக் கருதப்படுகிறது [53]. அதன்படி, மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவைத் தூண்டுவது ஸ்டாரோஸ்போரின் (STS) [14] உள்ளிட்ட சேர்மங்களால் தூண்டப்பட்ட அப்போப்டொசிஸின் முன்னேற்றத்தைத் தாமதப்படுத்துகிறது. எஸ்டிஎஸ்-மத்தியஸ்த அப்போப்டொசிஸிலிருந்து RPE-1 செல்களை SFN பாதுகாக்கிறதா என்பதைத் தீர்மானிக்க, இதற்கு Nrf2 தேவையா என்பதைத் தீர்மானிக்க, பாலி ஏடிபி ரைபோஸ் பாலிமரேஸ் (PARP) பிளவு, செயல்படுத்தப்பட்ட காஸ்பேஸ்-3 இன் அடி மூலக்கூறு மற்றும் உறுதியான மார்க்கரை உடனடியாகத் தூண்டுவதற்கான மதிப்பீட்டை நாங்கள் நிறுவினோம். அப்போப்டொசிஸ். RPE-1 செல்களை 1 −M STS உடன் 6 மணிநேரத்திற்கு சிகிச்சையளிப்பது PARP இன் மிகவும் மிதமான பிளவை ஏற்படுத்தியது, ஆனால் இது SFN இணை சிகிச்சையால் தடுக்கப்பட்டது (எ.கா. படம். 4A, லேன் 3 மற்றும் 4). இந்த மதிப்பீட்டின் வலிமையை அதிகரிக்க, Bcl-XL என்ற ஆன்டி-அபோப்டோடிக் காரணியை இலக்காகக் கொண்டு siRNA உடன் முன்கூட்டியே சிகிச்சையளிப்பதன் மூலம், STS-தூண்டப்பட்ட அப்போப்டொசிஸுக்கு செல்களை மேலும் உணர்திறன் செய்தோம். இந்த முன் சிகிச்சையானது Bcl-XL இன் வெளிப்பாட்டைக் குறைத்தது மற்றும் STS க்கு வெளிப்படும் நேரத்தின் செயல்பாடாக PARP பிளவுகளை குறிப்பிடத்தக்க வகையில் ஊக்குவித்தது (படம். 4B, லேன் 2 ஐ லேன்கள் 4-10 உடன் ஒப்பிடவும்). முக்கியமாக, SFN உடன் 2 மணிநேர முன் சிகிச்சையானது STS க்கு வெளிப்படும் செல்களில் PARP பிளவுகளைத் தணித்தது (படம். 4C, லேன் 3 மற்றும் 4 மற்றும் லேன் 5 எதிராக 6). அதேபோல, CRISPR/Cas2 ஆல் Nrf9 இன் நிலையாகக் குறைக்கப்பட்ட செல்கள் SFN முன்-சிகிச்சை மூலம் STS நச்சுத்தன்மையிலிருந்து ஒப்பீட்டளவில் பாதுகாக்கப்பட்டன (படம். 4C, லேன் 11 மற்றும் 12 மற்றும் லேன் 13 மற்றும் 14 மற்றும் படம். 4D). இந்த பாதுகாப்பு PARP பிளவு (படம். 4C மற்றும் D) மற்றும் செல்லுலார் உருவவியல் (படம். 4E) இரண்டையும் வாசிப்புகளாகப் பயன்படுத்திக் காணப்பட்டது. CRISPR/Cas2 ஆல் Nrf9 குறைவின் செயல்திறன் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங் மூலம் உறுதிப்படுத்தப்பட்டது (படம் 4C, Nrf2 ப்ளாட்). முன்னறிவிக்கப்பட்டபடி, Drp1 இன் செல்களைக் குறைக்கிறது, இது ஹைப்பர்ஃப்யூஷன் பினோடைப்பை (படம் 1A) தருகிறது, மேலும் SFN உடன் அடைகாக்கப்பட்ட கட்டுப்பாட்டு கலங்களுடன் ஒப்பிடும்போது STS க்கு பதில் PARP பிளவுகளைத் தடுக்கிறது (படம். 4F மற்றும் G). ஒன்றாக, இந்த கண்டுபிடிப்புகள் Nrf1 இன் நிலைப்படுத்தல் மற்றும் செயல்படுத்தலில் இருந்து சுயாதீனமாக, Drp2 செயல்பாட்டை கட்டுப்படுத்தும் திறன் மூலம் அப்போப்டொசிஸுக்கு எதிராக SFN பாதுகாப்பை வழங்குகிறது.

கலந்துரையாடல்

KEAP1-Nrf2-ARE பாதையில் அதன் விளைவுகளிலிருந்து மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு / இணைவு இயக்கவியலை SFN மாற்றியமைக்கிறது என்பதை நாங்கள் கண்டறிந்துள்ளோம். மைட்டோகாண்ட்ரியல் செயலிழப்பு மற்றும் ROS உற்பத்தி ஆகியவற்றுக்கு இடையே உள்ள ஒரு அனுமான இணைப்பு மற்றும் Nrf2 ஐ செயல்படுத்துவதன் மூலம் மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் இருந்து பெறப்பட்ட ஃப்ரீ ரேடிக்கல்களை குறைக்க வேண்டியதன் அவசியத்தின் காரணமாக இது புதிரானது. புரோஸ்டேட் புற்றுநோய், தடுப்பு நுரையீரல் நோய் மற்றும் அரிவாள் உயிரணு நோய் [30], [7], [10], [47], [XNUMX], [XNUMX], [XNUMX] SFN இன் இந்த கூடுதல் செயல்பாட்டுத் தாக்கம் சாத்தியமான முக்கியத்துவம் வாய்ந்ததாக உள்ளது. XNUMX].

SFN ஒரு ஐசோதியோசயனேட் [56] மற்றும் இது Nrf2 சிதைவை [1] அடக்குவதற்கு முக்கியமான KEAP2 சிஸ்டைன்களை நேரடியாக அசைலேட் செய்வதன் மூலம் Nrf21 சிக்னலிங்கை செயல்படுத்துகிறது. . எங்கள் தரவு Drp1 ஆனது SFN ஆல் எதிர்மறையாக கட்டுப்படுத்தப்படுவதை வலுவாக ஆதரிக்கிறது. இந்த அறிவு இடைவெளி இருந்தபோதிலும், SFN சிகிச்சையின் பிரதிபலிப்பாக மைட்டோகாண்ட்ரியா மற்றும் பெராக்ஸிசோம்கள் இரண்டும் மிகைப்படுத்தப்படுவதால் Drp1 இன் செயல்பாடு SFN ஆல் சமரசம் செய்யப்படுகிறது. கூடுதலாக, மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் உள்ளூர்மயமாக்கும் மற்றும் குவிக்கும் Drp1 இன் அளவை SFN குறைக்கிறது (படம். 3). எங்கள் சோதனைகள் அனைத்து எண்டோஜெனஸ் புரதங்களுடனும் செய்யப்பட்டதால், மைட்டோகாண்ட்ரியல் பிளவு தளங்களில் Drp1 ஐக் கண்டறிவது நிலையான நிலையில் உள்ளது, இதன் விளைவாக, SFN ஆல் ஏற்படும் நொதியின் தக்கவைப்புக் குறைபாட்டிற்கும் ஆட்சேர்ப்புக்கும் இடையில் நாம் வேறுபடுத்திப் பார்க்க முடியாது. மேலும், Drp1 ஆட்சேர்ப்பைத் தடுக்க மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் (Fis1 அல்லது Mff) ஒரு ஏற்பியை SFN அசைலேட் செய்யும் வாய்ப்பை எங்களால் அகற்ற முடியாது, Drp1 நேரடியாக மாற்றியமைக்கப்பட்டுள்ளது என்று நாங்கள் சந்தேகிக்கிறோம். Drp1 ஆனது ஒன்பது சிஸ்டைன்களைக் கொண்டுள்ளது, அவற்றில் எட்டு ஒலிகோமரைசேஷனுக்கு [3] தேவைப்படும் மத்திய டொமைனுக்குள் உள்ளன, மேலும் அவற்றில் ஒன்று Drp1 இன் சி-டெர்மினஸில் உள்ள GTPase Effector Domain (GED) இல் உள்ளது. இந்த சிஸ்டைன்களில் ஏதேனும் ஒன்றின் நேரடி அசைலேஷன் Drp1 இல் ஒரு செயல்பாட்டுக் குறைபாட்டை ஏற்படுத்தக்கூடும், எனவே மைட்டோகாண்ட்ரியல் இயக்கவியலில் SFN இன் விளைவை அடிக்கோடிட்டுக் காட்டுகிறது. குறிப்பிடத்தக்க வகையில், ஒலிகோமரைசேஷன் மற்றும் வினையூக்க செயல்பாட்டின் குறைபாடுகள் மைட்டோகாண்ட்ரியாவில் Drp1 ஐ தக்கவைப்பதை ரத்து செய்யலாம் என்று முந்தைய வேலைகள் தெரிவிக்கின்றன [52]. GED டொமைனில் உள்ள Cys644 என்பது, இந்த சிஸ்டைனின் பிறழ்வு Drp1 GTPase செயல்பாட்டைக் குறைக்கும் பிறழ்வுகளை [4] மற்றும் இந்த குறிப்பிட்ட சிஸ்டைன் தியோல்-ரியாக்டிவ் எலக்ட்ரோஃபைல்களால் மாற்றியமைக்கப்படுகிறது என்பதைக் காட்டும் முந்தைய வேலையின் அடிப்படையில் குறிப்பாக கவர்ச்சிகரமான இலக்காகும் [9]. இந்த நிலுவையில் உள்ள கேள்வியின் தீர்வுக்கு மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரிக் சரிபார்ப்பு தேவைப்படும். சுருக்கமாக, மருத்துவ ரீதியாக தொடர்புடைய கலவை SFNக்கான சைட்டோபுரோடெக்டிவ் செயல்பாட்டை நாங்கள் கண்டறிந்துள்ளோம். முதன்மை ஆன்டி-ஆக்ஸிடன்ட் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணி Nrf2 ஐ செயல்படுத்துவதோடு, SFN மைட்டோகாண்ட்ரியல் மற்றும் பெராக்ஸிசோமல் இணைவை ஊக்குவிக்கிறது, மேலும் இந்த விளைவு Nrf2 இலிருந்து சுயாதீனமாக உள்ளது. மைட்டோகாண்ட்ரியல் மற்றும் பெராக்ஸிசோமால் பிளவின் முதன்மை மத்தியஸ்தரான GTPase Drp1 இன் செயல்பாட்டைக் குறைப்பது இந்த நிகழ்வின் அடிப்படையிலான வழிமுறையாகும். SFN-மத்தியஸ்த மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவின் ஒரு முக்கிய விளைவு என்னவென்றால், செல்கள் அப்போப்டொசிஸ் தூண்டியான ஸ்டாரோஸ்போரின் நச்சு விளைவுகளுக்கு எதிர்ப்புத் தெரிவிக்கின்றன. SFN இன் இந்த கூடுதல் சைட்டோபுரோடெக்டிவ் நடவடிக்கையானது, வயது முக்கிய ஆபத்து காரணியாக இருக்கும் (எ.கா. பார்கின்சன் நோய், அல்சைமர் நோய், வயது தொடர்பான மாகுலர் டிஜெனரேஷன்) பல நரம்பு சிதைவு நோய்களில் குறிப்பிட்ட மருத்துவப் பயன்பாடாக இருக்கலாம். Nrf2 [35], [36], [48] இன் நிலைகள் மற்றும்/அல்லது ஒழுங்குபடுத்தல்.

பொருட்கள் மற்றும் முறைகள்

அப்போப்டொசிஸ் மதிப்பீடுகள்

கீழே குறிப்பிடப்பட்டுள்ளபடி செல்கள் விதைக்கப்பட்டு siRNA உடன் மாற்றப்பட்டன. மைட்டோகாண்ட்ரியல் இணைவைத் தூண்டுவதற்காக செல்கள் 50 மணிநேரத்திற்கு 2 ?எம் சல்போராபேன் மூலம் முன் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டன, பின்னர் அப்போப்டொசிஸைத் தூண்டுவதற்கு 1 ?எம் ஸ்டாரோஸ்போரின் மூலம் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது. அறுவடை நேரத்தில், ஊடகங்கள் தனிப்பட்ட குழாய்களில் சேகரிக்கப்பட்டு, பெல்லட் அப்போப்டொடிக் செல்களுக்கு அதிவேக மையவிலக்குக்கு உட்படுத்தப்பட்டன. இந்த செல் துகள்கள் ஒட்டிய செல்களுடன் இணைக்கப்பட்டு, 2 மடங்கு செறிவூட்டப்பட்ட லெம்மிலி பஃப்பரில் கரைக்கப்பட்டது. மாதிரிகள் PARP எதிர்ப்பு வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங்கிற்கு உட்படுத்தப்பட்டன.

CRISPR/Cas9 கன்ஸ்ட்ரக்ட் ஜெனரேஷன்

LentiCRISPR/eCas9 1.1 ஐ உருவாக்க, LentiCRISPR v2 (addgene #52961) முதலில் Age1 மற்றும் BamH1 உடன் வெட்டப்பட்டது. அடுத்து, eSpCas9 9 (addgene #1.1) இலிருந்து SpCas71814 பின்வரும் ப்ரைமர்களைப் பயன்படுத்தி Age1 மற்றும் BamH1 ஓவர்ஹாங்களுடன் PCR பெருக்கப்பட்டது (Forward AGCGCACCGGTTCTAGAGCGCTGCCACACATGGACTATAAGGACCACGAT, மேலே உள்ள GATCGTCGTT Benchling.com ஐப் பயன்படுத்தி sgRNA வரிசைகள் தீர்மானிக்கப்பட்டது. குறியிடல் வரிசையை குறிவைக்க அளவுருக்கள் அமைக்கப்பட்டன. The following sequences (targeting sequence underlined, hs sgNFE2L2#1 sense CACCGCGACGGAAAGAGTATGAGC, antisense AAACGCTCATACTCTTTCCGTCGC; hs sgNFE2L2#2 sense CACCGGTTTCTGACTGGATGTGCT, antisense AAACAGCACATCCAGTCAGAAACC; hs sgNFE2L2#3 sense CACCGGAGTAGTTGGCAGATCCAC, antisense AAACGTGGATCTGCCAACTACTCC) were annealed and ligated into BsmB1 cut LentiCRISPR/eCas9 1.1. லென்டிவைரலால் பாதிக்கப்பட்ட RPE-1 செல்கள் ப்யூரோமைசினுடன் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு, தொகுக்கப்பட்ட மக்கள்தொகையாக பராமரிக்கப்பட்டது. இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸ் மற்றும் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங் மூலம் நாக் அவுட் உறுதி செய்யப்பட்டது.

செல் கலாச்சாரம் மற்றும் இடமாற்றங்கள்

டெலோமரேஸ் (RPE-1) (ATCC) உடன் மாற்றப்பட்ட மனித விழித்திரை நிறமி எபிடெலியல் செல்கள், பென்சிலின், ஸ்ட்ரெப்டோமைசின், 1X அத்தியாவசியமற்ற அமினோன் அமிலம் (Life Technoine அமிலம்) ஆகியவற்றுடன் கூடுதலாக 1 g/L குளுக்கோஸ் கொண்ட Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) இல் வளர்க்கப்பட்டது. மற்றும் 10% கரு போவின் சீரம் (லைஃப் டெக்னாலஜிஸ்). siRNA- இடமாற்றங்களுக்கு, 30,000–35,000 செல்கள்/mL ஒரே இரவில் விதைக்கப்பட்டது. செல்கள் சீரம் இல்லாத DMEM இல் நீர்த்த 10 nM siRNA ஐப் பெற்றன மற்றும் 0.3% இன்டர்ஃபெரின் டிரான்ஸ்ஃபெக்ஷன் ரியாஜென்ட் (பாலிபிளஸ்) உடன் இணைக்கப்பட்டன. அப்போப்டொசிஸ் உணர்திறனுக்காக, செல்கள் 1 nM Bcl-XL siRNA ஐப் பெற்றன. இடமாற்றத்திற்குப் பிறகு 2-3 நாட்களுக்குப் பிறகு செல்கள் அறுவடை செய்யப்பட்டன.

இரசாயனங்கள், ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் siRNA ஒலிகோஸ்

?-டூபுலின் (செல் சிக்னலிங்), ?-டூபுலின் (சிக்மா), Drp1 (BD பயோசயின்சஸ்), KEAP1 (Proteintech), Lamin B1 (Abcam), PARP (செல் சிக்னலிங்), PMP70 (Abcam) மற்றும் Tom20 (BD Biosciences) ஆகியவற்றுக்கு எதிரான ஆன்டிபாடிகள் ) வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங் மற்றும் இம்யூனோஃப்ளோரெசென்ஸுக்கு 1:1000 நீர்த்தங்கள் பயன்படுத்தப்பட்டன. உட்புறத்தில், Nrf2 எதிர்ப்பு முயல் ஆன்டிபாடி 1:2000 இல் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டிங்கிற்காக பயன்படுத்தப்பட்டது [34], [59]. சல்போராபேன் (சிக்மா) மற்றும் ஸ்டாரோஸ்போரின் (டோக்ரிஸ்) முறையே 50 ?M மற்றும் 1 ?M இல் பயன்படுத்தப்பட்டது. Drp1 (Dharmacon), Nrf2 (Dharmacon), KEAP1 (செல் சிக்னலிங்) மற்றும் Bcl-XL (செல் சிக்னலிங்) ஆகியவற்றுக்கு எதிரான siRNAகள் வேறுவிதமாகக் குறிப்பிடப்படாவிட்டால் 10 nM இல் பயன்படுத்தப்பட்டன.

இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸ் மற்றும் விவோ லேபிளிங்கில்

18 மிமீ கண்ணாடி உறைகளில் விதைக்கப்பட்ட செல்கள் வாகனம் அல்லது மருந்துடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டு, 3.7% ஃபார்மால்டிஹைடில் சரி செய்யப்பட்டு, பின்னர் 0.2% ட்ரைட்டான் எக்ஸ்-100/பிபிஎஸ்ஸில் 10 நிமிடங்களுக்கு பனியில் ஊடுருவியது. முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் 3% போவின் சீரம் அல்புமினில் (பிஎஸ்ஏ) பிபிஎஸ்ஸில் ஒரே இரவில் 4 ° C இல் அடைக்கப்பட்டுள்ளன. பிபிஎஸ் கழுவலைத் தொடர்ந்து, 1% BSA/PBS இல் இனங்கள்-பொருத்தமான, Alexa488- அல்லது Alexa546-, இணைந்த இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகள் (நீர்த்த 1:1000) மற்றும் 0.1 ?g/mL DAPI (சிக்மா) ஆகியவற்றில் 3 மணிநேரத்திற்கு செல்கள் அடைகாத்தன. மைட்டோகாண்ட்ரியா ஆன்டி-டாம்20 இம்யூனோஃப்ளோரெசன்ஸ் மூலம் அல்லது 200 nM MitoTracker Red CMXRos (மூலக்கூறு ஆய்வுகள், Inc.) இல் உள்ள செல்களை அடைப்பதன் மூலம் சீரம் இல்லாத DMEM இல் 30 நிமிடங்களுக்கு 37 ºC இல் சரிசெய்வதற்கு முன் காட்சிப்படுத்தப்பட்டது.

நுண்ணோக்கி மற்றும் பட பகுப்பாய்வு

Immunofluorescence மாதிரிகள் LSM710 Confocal microscope (Carl Zeiss) இல் பார்க்கப்பட்டன. 63X அல்லது 100X ஆயில் அமிர்ஷன் நோக்கங்களைப் பயன்படுத்தி மைக்ரோகிராஃப்கள் கைப்பற்றப்பட்டன மற்றும் அடோப் ஃபோட்டோஷாப் சிஎஸ்6 ஐப் பயன்படுத்தி சரிசெய்யப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட்ட படங்கள். கார்ல் ஜெய்ஸ் LSM710 இணை-உள்ளூர்மயமாக்கல் அம்சத்தைப் பயன்படுத்தி இணை-உள்ளூர்மயமாக்கல் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. மற்றபடி குறிப்பிடப்பட்டாலன்றி, முழுவதும் அளவுகோல்கள் 10 மீ. மைட்டோகாண்ட்ரியல் உருவவியல் குருட்டு மதிப்பெண் மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது. ஒரு கலத்தின் மைட்டோகாண்ட்ரியா பல, சுற்று, பாகுபாடு கொண்ட புள்ளியாகப் பராமரிக்கப்பட்டால், செல் 'பிளவு' என மதிப்பிடப்பட்டது. தனிப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியா பிரித்தறிய முடியாததாக இருந்தால் மற்றும் முழு மைட்டோகாண்ட்ரியல் நெட்வொர்க் தொடர்ந்து தோன்றினால், செல் "இணைவு" என மதிப்பிடப்பட்டது. கிளஸ்டரிங் மைட்டோகாண்ட்ரியா உட்பட மற்ற அனைத்து செல்களும் "இடைநிலை" என மதிப்பெண் பெற்றன.

துணை செல் பின்னங்கள்

RPE-1 செல்கள் சங்கமமாக வளர்ந்தன. PBS கழுவலைத் தொடர்ந்து, செல்கள் 600°g இல் 10 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்குக்கு உட்படுத்தப்பட்டு, 600 ?L தனிமைப்படுத்தல் பஃபரில் (210 mM Mannitol, 70 mM சுக்ரோஸ், 5 mM MOPS, 1 mM EDTA pH 7.4+1 mM PMSF) மீண்டும் இணைக்கப்பட்டது. டவுன்ஸ் ஹோமோஜெனிசரில் 30 முறை இடைநீக்கம் செய்யப்பட்டது. ஹோமோஜெனேட்டின் ஒரு பகுதியானது 'முழு செல் லைசேட்டாகப் பாதுகாக்கப்பட்டது.' மீதியானது 800ºகிராமில் 10 நிமிடங்களுக்கு பெல்லட் அணுக்களுக்கு மையவிலக்குக்கு உட்படுத்தப்பட்டது. மீதமுள்ள கருக்கள் மற்றும் இணைக்கப்படாத செல்களை அழிக்க சூப்பர்நேட்டண்டுகள் 1500 நிமிடங்களுக்கு 10 கிராம் மையவிலக்குக்கு உட்படுத்தப்பட்டன. இந்த சூப்பர்நேட்டன்ட் 15,000 நிமிடங்களுக்கு 15g இல் மையவிலக்குக்கு உட்படுத்தப்பட்டு பெல்லட் மைட்டோகாண்ட்ரியாவிற்கு உட்படுத்தப்பட்டது. சூப்பர்நேட்டன்ட் சைட்டோசோலிக் பின்னமாகப் பாதுகாக்கப்பட்டது. பெல்லட் பிபிஎஸ் மூலம் மெதுவாகக் கழுவப்பட்டு, தனித்தனி இடையகத்தில் மீண்டும் இணைக்கப்பட்டது. ஒவ்வொரு பின்னத்தின் புரதச் செறிவு பிசின்கோனினிக் அமிலம் (பிசிஏ) மதிப்பீட்டின் மூலம் அளவிடப்பட்டது மற்றும் அதற்கு சமமான புரதம் SDS-PAGE மூலம் தீர்க்கப்பட்டது.

வெஸ்டர்ன் பிளாட்டிங்

செல்கள் பிபிஎஸ்ஸில் கழுவப்பட்டு, 2 மடங்கு செறிவூட்டப்பட்ட லெம்மிலி கரைக்கும் இடையக (100 எம்எம் டிரிஸ் [பிஹெச் 6.8], 2% எஸ்டிஎஸ், 0.008% ப்ரோமோபீனால் ப்ளூ, 2% 2-மெர்காப்டோஎத்தனால், 26.3% க்ளிசரால், மற்றும் 0.001.ரினின் 5%) கரைக்கப்பட்டது. சோடியம் டோடெசில் சல்பேட் (SDS) பாலிஅக்ரிலாமைடு ஜெல்களில் ஏற்றப்படுவதற்கு முன் லைசேட்டுகள் 1 நிமிடம் வேகவைக்கப்பட்டது. புரதங்கள் நைட்ரோசெல்லுலோஸ் சவ்வுகளுக்கு மாற்றப்பட்டு, 5% பால்/டிபிஎஸ்டியில் 5 மணிநேரத்திற்கு சவ்வுகள் தடுக்கப்பட்டன. முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் 4% பால்/டிபிஎஸ்டியில் நீர்த்தப்பட்டு ஒரே இரவில் 5 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டது. ஹார்ஸ்ராடிஷ் பெராக்ஸிடேஸ் (HRP)-இணைந்த இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகள் XNUMX% பால்/TBST இல் நீர்த்தப்பட்டன. இமேஜ்ஜே மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி மேம்படுத்தப்பட்ட கெமிலுமினென்சென்ஸ் மற்றும் டென்சிடோமெட்ரிக் அளவீடுகள் மூலம் கறைகள் செயலாக்கப்பட்டன.

சல்ஃபோராபேன் என்பது ப்ரோக்கோலி, முட்டைக்கோஸ், காலிஃபிளவர், காலே மற்றும் காலார்ட்ஸ் உள்ளிட்ட சிலுவை காய்கறிகளிலிருந்து பெறப்பட்ட ஆர்கனோசல்ஃபர் பொருட்களின் ஐசோதியோசயனேட் சேகரிப்பில் இருந்து ஒரு இரசாயனமாகும். என்சைம் மைரோசினேஸ் குளுக்கோராபனின், குளுக்கோசினோலேட்டை, சல்போராபேன்-குளுகோசினோலேட் என்றும் அழைக்கப்படும் சல்ஃபோராபேன் ஆக மாற்றும் போது சல்ஃபோராபேன் உற்பத்தி செய்யப்படுகிறது. ப்ரோக்கோலி முளைகள் மற்றும் காலிஃபிளவரில் குளுக்கோராபனின் அல்லது சல்போராபேன் முன்னோடி செறிவு அதிகமாக உள்ளது. பல்வேறு உடல்நலப் பிரச்சினைகளைத் தடுக்க மனித உடலின் ஆக்ஸிஜனேற்ற திறன்களை சல்ஃபோராபேன் மேம்படுத்துகிறது என்பதை ஆராய்ச்சி ஆய்வுகள் நிரூபித்துள்ளன. டாக்டர். அலெக்ஸ் ஜிமினெஸ் DC, CCST இன்சைட்

புற்றுநோய், இறப்பு, முதுமை, மூளை மற்றும் நடத்தை, இதய நோய் மற்றும் பலவற்றில் சல்போராபேன் மற்றும் அதன் விளைவுகள்

ஐசோதியோசயனேட்டுகள் உங்கள் உணவில் நீங்கள் பெறக்கூடிய மிக முக்கியமான தாவர கலவைகள் ஆகும். இந்த வீடியோவில் நான் அவர்களுக்காக இதுவரை செய்யப்படாத மிக விரிவான வழக்கை உருவாக்குகிறேன். குறுகிய கவனம்? கீழே உள்ள நேரப் புள்ளிகளில் ஒன்றைக் கிளிக் செய்வதன் மூலம் உங்களுக்குப் பிடித்த தலைப்புக்குச் செல்லவும். முழு காலவரிசை கீழே.

முக்கிய பிரிவுகள்:

• 00:01:14 - புற்றுநோய் மற்றும் இறப்பு
• 00:19:04 - முதுமை
• 00:26:30 - மூளை மற்றும் நடத்தை
• 00:38:06 - இறுதி மறுபரிசீலனை
• 00:40:27 - டோஸ்

முழு காலவரிசை:

• 00:00:34 – வீடியோவின் முக்கிய மையமான சல்போராபேன் அறிமுகம்.
• 00:01:14 - க்ரூசிஃபெரஸ் காய்கறி நுகர்வு மற்றும் அனைத்து காரணங்களின் இறப்பு குறைப்பு.
• 00:02:12 - புரோஸ்டேட் புற்றுநோய் ஆபத்து.
• 00:02:23 - சிறுநீர்ப்பை புற்றுநோய் ஆபத்து.
• 00:02:34 - புகைப்பிடிப்பவர்களுக்கு நுரையீரல் புற்றுநோய் ஆபத்து.
• 00:02:48 - மார்பக புற்றுநோய் ஆபத்து.
• 00:03:13 - அனுமானம்: உங்களுக்கு ஏற்கனவே புற்றுநோய் இருந்தால் என்ன செய்வது? (இடையிடல்)
• 00:03:35 – புற்றுநோய் மற்றும் இறப்பு தொடர்பான தரவுகளை இயக்கும் நம்பத்தகுந்த வழிமுறை.
• 00:04:38 - சல்போராபேன் மற்றும் புற்றுநோய்.
• 00:05:32 - எலிகளில் சிறுநீர்ப்பை கட்டி வளர்ச்சியில் ப்ரோக்கோலி முளை சாறு வலுவான விளைவைக் காட்டும் விலங்கு சான்றுகள்.
• 00:06:06 - புரோஸ்டேட் புற்றுநோயாளிகளில் சல்ஃபோராபேன் நேரடியாக நிரப்புவதன் விளைவு.
• 00:07:09 - உண்மையான மார்பக திசுக்களில் ஐசோதியோசயனேட் வளர்சிதை மாற்றங்களின் உயிர் குவிப்பு.
• 00:08:32 - மார்பக புற்றுநோய் ஸ்டெம் செல்களைத் தடுப்பது.
• 00:08:53 - வரலாற்றுப் பாடம்: பண்டைய ரோமில் கூட பிராசிகாக்கள் ஆரோக்கிய பண்புகளைக் கொண்டிருப்பதாக நிறுவப்பட்டது.
• 00:09:16 – சல்போராபேன் புற்றுநோய் வெளியேற்றத்தை மேம்படுத்தும் திறன் (பென்சீன், அக்ரோலின்).
• 00:09:51 - ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட் மறுமொழி கூறுகள் வழியாக மரபணு மாற்றமாக NRF2.
• 00:10:10 – NRF2 ஆக்டிவேஷன் குளுதாதயோன்-எஸ்-கான்ஜுகேட்ஸ் வழியாக புற்றுநோயை வெளியேற்றுவதை எவ்வாறு மேம்படுத்துகிறது.
• 00:10:34 - பிரஸ்ஸல்ஸ் முளைகள் குளுதாதயோன்-எஸ்-டிரான்ஸ்ஃபெரேஸை அதிகரிக்கின்றன மற்றும் டிஎன்ஏ பாதிப்பைக் குறைக்கின்றன.
• 00:11:20 - ப்ரோக்கோலி முளை பானம் பென்சீன் வெளியேற்றத்தை 61% அதிகரிக்கிறது.
• 00:13:31 - ப்ரோக்கோலி ஸ்ப்ரூட் ஹோமோஜெனேட் மேல் சுவாசப்பாதையில் ஆக்ஸிஜனேற்ற நொதிகளை அதிகரிக்கிறது.
• 00:15:45 - சிலுவை காய்கறி நுகர்வு மற்றும் இதய நோய் இறப்பு.
• 00:16:55 - ப்ரோக்கோலி ஸ்ப்ரூட் பவுடர் இரத்த கொழுப்பு மற்றும் ஒட்டுமொத்த இதய நோய் அபாயத்தை மேம்படுத்துகிறது வகை 2 நீரிழிவு நோயாளிகள்.
• 00:19:04 - வயதான பிரிவின் ஆரம்பம்.
• 00:19:21 - சல்போராபேன்-செறிவூட்டப்பட்ட உணவு வண்டுகளின் ஆயுட்காலம் 15 முதல் 30% வரை அதிகரிக்கிறது (சில நிபந்தனைகளில்).
• 00:20:34 - நீண்ட ஆயுளுக்கு குறைந்த வீக்கத்தின் முக்கியத்துவம்.
• 00:22:05 - குரூசிஃபெரஸ் காய்கறிகள் மற்றும் ப்ரோக்கோலி ஸ்ப்ரூட் பவுடர் மனிதர்களில் பல்வேறு வகையான அழற்சி குறிப்பான்களைக் குறைப்பதாகத் தெரிகிறது.
• 00:23:40 – மிட்-வீடியோ ரீகேப்: புற்றுநோய், வயதான பிரிவுகள்
• 00:24:14 - முதுமையில் சல்போராபேன் தகவமைப்பு நோயெதிர்ப்புச் செயல்பாட்டை மேம்படுத்தலாம் என்று சுட்டி ஆய்வுகள் தெரிவிக்கின்றன.
• 00:25:18 – சல்ஃபோராபேன், வழுக்கை மவுஸ் மாதிரியில் முடி வளர்ச்சியை மேம்படுத்தியது. படம் 00:26:10.
• 00:26:30 - மூளை மற்றும் நடத்தை பிரிவின் ஆரம்பம்.
• 00:27:18 – ஆட்டிசத்தில் ப்ரோக்கோலி முளை சாற்றின் விளைவு.
• 00:27:48 - ஸ்கிசோஃப்ரினியாவில் குளுக்கோராபனின் விளைவு.
• 00:28:17 - மனச்சோர்வு விவாதத்தின் தொடக்கம் (நம்பத்தகுந்த வழிமுறை மற்றும் ஆய்வுகள்).
• 00:31:21 – அழுத்தத்தால் தூண்டப்பட்ட மனச்சோர்வின் 10 வெவ்வேறு மாதிரிகளைப் பயன்படுத்தி மவுஸ் ஆய்வு, ஃப்ளூக்ஸெடின் (ப்ரோசாக்) போலவே சல்ஃபோராபேன் பயனுள்ளதாக இருக்கும்.
• 00:32:00 – எலிகளில் குளுக்கோராபனின் நேரடியாக உட்கொள்வது சமூக தோல்வி மன அழுத்த மாதிரியிலிருந்து மனச்சோர்வைத் தடுப்பதில் இதேபோல் பயனுள்ளதாக இருக்கும் என்று ஆய்வு காட்டுகிறது.
• 00:33:01 - நியூரோடிஜெனரேஷன் பிரிவின் ஆரம்பம்.
• 00:33:30 – சல்போராபேன் மற்றும் அல்சைமர் நோய்.
• 00:33:44 – சல்போராபேன் மற்றும் பார்கின்சன் நோய்.
• 00:33:51 – சல்போராபேன் மற்றும் ஹங்டிங்டன் நோய்.
• 00:34:13 - சல்ஃபோராபேன் வெப்ப அதிர்ச்சி புரதங்களை அதிகரிக்கிறது.
• 00:34:43 - அதிர்ச்சிகரமான மூளை காயம் பிரிவின் ஆரம்பம்.
• 00:35:01 - TBI நினைவகத்தை மேம்படுத்திய உடனேயே சல்போராபேன் செலுத்தப்பட்டது (சுட்டி ஆய்வு).
• 00:35:55 ​​- சல்ஃபோராபேன் மற்றும் நியூரானல் பிளாஸ்டிசிட்டி.
• 00:36:32 – எலிகளில் டைப் II நீரிழிவு மாதிரியில் சல்போராபேன் கற்றலை மேம்படுத்துகிறது.
• 00:37:19 - சல்போராபேன் மற்றும் டுச்சேன் தசைநார் சிதைவு.
• 00:37:44 - தசை செயற்கைக்கோள் செல்களில் Myostatin தடுப்பு (விட்ரோவில்).
• 00:38:06 – லேட்-வீடியோ மறுபரிசீலனை: இறப்பு மற்றும் புற்றுநோய், டிஎன்ஏ சேதம், ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தம் மற்றும் வீக்கம், பென்சீன் வெளியேற்றம், இருதய நோய், வகை II நீரிழிவு, மூளையில் விளைவுகள் (மன அழுத்தம், மன இறுக்கம், ஸ்கிசோஃப்ரினியா, நியூரோடிஜெனரேஷன்), NRF2 பாதை.
• 00:40:27 - ப்ரோக்கோலி முளைகள் அல்லது சல்ஃபோராபேன் அளவைக் கண்டறிவது பற்றிய எண்ணங்கள்.
• 00:41:01 - வீட்டில் முளைப்பது பற்றிய நிகழ்வுகள்.
• 00:43:14 - சமையல் வெப்பநிலை மற்றும் சல்ஃபோராபேன் செயல்பாடு.
• 00:43:45 - குளுகோராபனினில் இருந்து சல்போராபேன் குடல் பாக்டீரியாவை மாற்றுகிறது.
• 00:44:24 - காய்கறிகளிலிருந்து செயலில் உள்ள மைரோசினேஸுடன் இணைந்தால் சப்ளிமெண்ட்ஸ் சிறப்பாகச் செயல்படும்.
• 00:44:56 - சமையல் நுட்பங்கள் மற்றும் சிலுவை காய்கறிகள்.
• 00:46:06 - ஐசோதியோசயனேட்டுகள் கோயிட்ரோஜன்களாக.

அங்கீகாரங்களாகக்

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716302750

சல்போராபேன் எவ்வாறு உற்பத்தி செய்யப்படுகிறது?

வெப்பமாக்கல் எபிதியோஸ்பெசிஃபையர் புரோட்டீன் செயல்பாட்டைக் குறைக்கிறது மற்றும் ப்ரோக்கோலியில் சல்ஃபோராபேன் உருவாக்கத்தை அதிகரிக்கிறது

சுருக்கம்

ப்ரோக்கோலியில் உள்ள ஐசோதியோசயனேட், சல்ஃபோராபேன், மிகவும் சக்திவாய்ந்த உணவு-பெறப்பட்ட ஆன்டிகார்சினோஜென்களில் ஒன்றாகும். இந்த சேர்மம் அப்படியே காய்கறியில் இல்லை, மாறாக இது அதன் குளுக்கோசினோலேட் முன்னோடியான குளுக்கோராபனின், மைரோசினேஸ், தியோகுளுகோசிடேஸ் நொதியின் செயல்பாட்டின் மூலம் உருவாகிறது, இது ப்ரோக்கோலி திசுக்களை நசுக்கும்போது அல்லது மெல்லும்போது. இருப்பினும், பல ஆய்வுகள் குளுகோராபனினில் இருந்து சல்ஃபோராபேன் விளைச்சல் குறைவாக உள்ளது என்றும், தாவர திசுக்கள் அறை வெப்பநிலையில் நசுக்கப்படும் போது, ​​உயிரியல் அல்லாத நைட்ரைல் அனலாக், சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல் முதன்மையான நீராற்பகுப்பு தயாரிப்பு என்றும் நிரூபித்துள்ளன. அராபிடோப்சிஸில், குளுக்கோசினோலேட்டுகளில் இருந்து நைட்ரைல் உருவாக்கம் வெப்ப உணர்திறன் புரதம், எபிதியோஸ்பெசிஃபையர் புரதம் (ESP), மைரோசினேஸின் வினையூக்கமற்ற இணை காரணி மூலம் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது என்று சமீபத்திய சான்றுகள் தெரிவிக்கின்றன. ப்ரோக்கோலி பூக்கள் மற்றும் முளைகளை சூடாக்குவதன் மூலம் சல்ஃபோராபேன் மற்றும் சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல் உருவாக்கம், ப்ரோக்கோலியில் ஈஎஸ்பி செயல்பாடு உள்ளதா என்பதைத் தீர்மானிப்பது, பின்னர் ஈஎஸ்பி செயல்பாடு, சல்ஃபோராபேன் உள்ளடக்கம் மற்றும் உயிர்ச் செயல்பாடு ஆகியவற்றில் வெப்பம் சார்ந்த மாற்றங்களைத் தொடர்புபடுத்துவது எங்கள் நோக்கங்களாகும். செல் கலாச்சாரத்தில் இரண்டாம் கட்ட நச்சு நீக்கம் என்சைம் குயினோன் ரிடக்டேஸ் (QR). ஒரே நேரத்தில் புதிய ப்ரோக்கோலி பூக்கள் அல்லது ப்ரோக்கோலி முளைகளை 60 °C க்கு சூடாக்குவது ஒரே நேரத்தில் சல்ஃபோராபேன் உருவாவதை அதிகரிக்கிறது மற்றும் சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல் உருவாக்கம் குறைகிறது. ESP செயல்பாட்டின் குறிப்பிடத்தக்க இழப்பு சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல் உருவாக்கம் குறைவதற்கு இணையாக இருந்தது. 70 டிகிரி செல்சியஸ் மற்றும் அதற்கு மேல் வெப்பப்படுத்துவது ப்ரோக்கோலி பூக்களில் இரண்டு தயாரிப்புகளின் உருவாக்கத்தையும் குறைக்கிறது, ஆனால் ப்ரோக்கோலி முளைகளில் இல்லை. வளர்ப்பு மவுஸ் ஹெபடோமா Hepa lclc7 செல்களில் QR இன் தூண்டல் இணையாக சல்ஃபோராபேன் உருவாக்கத்தில் அதிகரிக்கிறது.

ப்ரோக்கோலி பூக்கள் மற்றும் முளைகளை 60 °C க்கு முன் சூடாக்குவது, நசுக்கிய பின் காய்கறி திசு சாற்றில் சல்ஃபோராபேன் (SF) மைரோசினேஸ்-வினையூக்கி உருவாக்கத்தை கணிசமாக அதிகரிக்கிறது. இது சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல் (SF நைட்ரைல்) உருவாக்கம் மற்றும் எபிதியோஸ்பெசிஃபையர் புரதம் (ESP) செயல்பாடு குறைவதோடு தொடர்புடையது.

முக்கிய வார்த்தைகள்: ப்ரோக்கோலி, பிராசிகா ஒலரேசியா, க்ரூசிஃபெரே, புற்றுநோய், ஆன்டிகார்சினோஜென், சல்ஃபோராபேன், சல்ஃபோராபேன் நைட்ரைல், எபிதியோஸ்பெசிஃபையர் புரதம், குயினோன் ரிடக்டேஸ்

முடிவில், சல்போராபேன் என்பது ப்ரோக்கோலி மற்றும் பிற சிலுவை காய்கறிகளில் காணப்படும் பைட்டோ கெமிக்கல் ஆகும். உட்புற மற்றும் வெளிப்புற காரணிகளால் ஏற்படும் கட்டுப்பாடற்ற அளவு ஆக்ஸிஜனேற்றங்கள் மனித உடலில் ஆக்ஸிஜனேற்ற அழுத்தத்தை ஏற்படுத்தும், இது இறுதியில் பல்வேறு உடல்நலப் பிரச்சினைகளுக்கு வழிவகுக்கும். சல்ஃபோராபேன் Nrf2 இன் உற்பத்தியை செயல்படுத்த முடியும், இது ஒரு டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் காரணியாகும், இது ஆக்ஸிஜனேற்றங்களுக்கு செல்லின் பதிலைக் கட்டுப்படுத்தும் பாதுகாப்பு ஆக்ஸிஜனேற்ற வழிமுறைகளை ஒழுங்குபடுத்த உதவுகிறது. எங்கள் தகவலின் நோக்கம் உடலியக்க மற்றும் முதுகெலும்பு சுகாதார பிரச்சினைகள் மட்டுமே. விஷயத்தைப் பற்றி விவாதிக்க, தயவு செய்து டாக்டர் ஜிமினெஸைக் கேட்கவும் அல்லது எங்களை இங்கே தொடர்பு கொள்ளவும்915-850-0900.

டாக்டர் அலெக்ஸ் ஜிமெனெஸ் தொகுத்தார்

இதிலிருந்து குறிப்பிடப்பட்டது: Sciencedirect.com

கூடுதல் தலைப்பு விவாதம்: கடுமையான முதுகு வலி

முதுகு வலிஉலகளவில் இயலாமை மற்றும் வேலை நாட்களைத் தவறவிடுவதற்கு மிகவும் பொதுவான காரணங்களில் ஒன்றாகும். முதுகுவலியானது மருத்துவர் அலுவலகத்திற்குச் செல்வதற்கான இரண்டாவது பொதுவான காரணமாகும், இது மேல் சுவாச நோய்த்தொற்றுகளால் மட்டுமே அதிகமாக உள்ளது. ஏறக்குறைய 80 சதவீத மக்கள் தங்கள் வாழ்நாள் முழுவதும் ஒருமுறையாவது முதுகுவலியை அனுபவிப்பார்கள். முதுகெலும்பு என்பது மற்ற மென்மையான திசுக்களில் எலும்புகள், மூட்டுகள், தசைநார்கள் மற்றும் தசைகள் ஆகியவற்றால் ஆன ஒரு சிக்கலான அமைப்பாகும். இதன் காரணமாக, காயங்கள் மற்றும்/அல்லது மோசமான நிலைமைகள் போன்றவைஹெர்னியேட்டட் டிஸ்க்குகள், இறுதியில் முதுகுவலியின் அறிகுறிகளுக்கு வழிவகுக்கும். விளையாட்டு காயங்கள் அல்லது ஆட்டோமொபைல் விபத்து காயங்கள் பெரும்பாலும் முதுகுவலிக்கு அடிக்கடி காரணமாகின்றன, இருப்பினும், சில நேரங்களில் எளிமையான இயக்கங்கள் வலிமிகுந்த முடிவுகளை ஏற்படுத்தும். அதிர்ஷ்டவசமாக, சிரோபிராக்டிக் பராமரிப்பு போன்ற மாற்று சிகிச்சை விருப்பங்கள், முதுகெலும்பு சரிசெய்தல் மற்றும் கையேடு கையாளுதல்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் முதுகுவலியைக் குறைக்க உதவும், இறுதியில் வலி நிவாரணத்தை மேம்படுத்துகின்றன.

கூடுதல் கூடுதல் | முக்கிய தலைப்பு: பரிந்துரைக்கப்பட்ட எல் பாசோ, TX சிரோபிராக்டர்

***